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疾病防治與技術服務
如何準確把控豬場的關鍵問題與ELISA在豬病防控的臨床應用

一、血樣檢測的作用、意義

        A、采血檢測的作用主要為評估疫苗水平、調整免疫程序、反映豬群健康度,最重要的能很好的指導生產,提供明確的方向。

         B、每次檢測必須要有明確的檢測目的,才便于采血方案的制定。

       C、每個場必須要建立自己檢測結果的基準線,在沒有自己的基準線時可以參考相似豬場的基準線。

        D、血樣檢測得到數值產生的結果最好要有比較的對象,并會輔助于對孤立的數值分析。

       E、血樣檢測→數值結果分析→制定策略→策略執行及落實→血樣目的性復檢,這是個良性的循環。比如做了疫苗,但是要知道效果如何,就要按照這個循環做下去。

       二、采血計劃的制定

       1、檢測的次數及時間。正常的檢測,建議每年3次,分別為3月、7月、11月,每間隔4個月檢測一次;多次的檢測評估,結論才會更準確更接近事實。

       2、采樣的數量。以500頭母豬豬場為例:

      3、被采樣豬只的選擇。在目標豬群內隨機采樣,可采用的采樣模式有等距采樣和對角采樣。

      4、病豬的采樣不能與正常采樣混合在一起,需要單獨進行,單獨分析,因為它不能代表整個群體。

      5、需注意:監測豬瘟、藍耳時,采樣時間為疫苗接種后3-4周;采樣前建議使用抗應激藥物(如強力拜固舒等);同時建議避開配種后2周和臨產前2周這些敏感期種豬的采樣。

      三、檢測報告的分析、評估(如何看檢測結果)

      報告真正的關鍵在于相互溝通(從管理層、實驗室到生產一線),才能作出有價值、有核心的分析。

     (一)、偽狂犬gE野毒抗體及偽狂犬gB抗體

      S/N值小于0.6為陰性,大于0.7為陽性,在0.6-0.7之間為可疑。

     嚴重的溶血會對偽狂犬gE野毒抗體檢測結果有影響,容易出現可疑的結果,造成檢測結果的不準確。

    李老師以廣東四會某豬場為例。偽狂犬gE野毒報告顯示經產母豬陽性率100%,后備母豬陽性率0%,然后請大家猜測有什么問題?最終,通過與豬場的技術員溝通,其中主要因素是公豬偽狂犬gE野毒陽性率也是100%問題。如沒有做到溝通,使得實驗室很難作出準確的分析結果。所以實驗室得出檢測結果后,要結合豬場生產實際的情況,得到各方面的溝通,最終分析檢測結果,制定好的策略。

      (二)、豬瘟

     Block值(阻斷率)小于30是陰性;30至40是可疑;40以上是陽性,在阻斷率>50有?;ちΓ純固逅僥苤瀉拖嚶Φ牟《荊?。

      目前國內生產的豬瘟疫苗,接種后陽性率80%以上,CV值20以下是理想的。接種高效豬瘟苗后,阻斷率應該在55-95之間。

      (三)、藍耳病

       藍耳病檢測結果可關注的4個S/P值,分別為:S/P值為0.4、0.8、1.6、2.5。

       1)檢測結果0.4以下為陰性,0.4以上為陽性;

      感染藍耳病的豬并不是終身帶毒,它們是可以自我清除,最長時間是202天。但是在目前豬場養殖的復雜環境下,豬群容易受外界環境,及周圍的排毒豬只重復感染;

       2)藍耳病疫苗,有經典株(CH1R為代表)與變異株(JXA1為代表)之分,免疫經典株后,S/P值為0.8-1.2是免疫后的合理水平。免疫變異株后,從開始免疫之日起,14-21天檢測的S/P值能達到2.5-3.0。但接種疫苗后的1個半月,逐步衰減,穩定在1.6左右,這是變異株疫苗的穩定水平。

       3)同時藍耳的S/P值在2.5或者以上,不能說感染了野毒,只能說明豬群有感染的壓力大。S/P>2.5,病毒血癥;S/P在3.5~5.0,出現急性感染。只要哪個階段的S/P 超過2.5樣品數越多,那個階段出現問題的可能性就會越大。

       Ex:若哺乳母豬監測的PRRS S/P 超過2.5的比例>10%,那么保育豬就會出現一系列問題(如繼發副豬、鏈球、支原體、圓環等呼吸道疾病及表現皮炎腎病綜合癥的臨床問題)。

       如果斷奶母豬,懷孕階段比例較高,則在配種時的空懷、返情的比例會出現一定程度的波動;

       公豬2.5比例特別高,配種、分娩都有不同程度的影響;影響程度就看母豬群對藍耳易感豬的比例了

     豬群藍耳病是否有問題,關鍵還是看分布圖,如果出現高低不一(有0.4以下也有2.5以上),說明豬群不穩定。

       如果在疫苗接種2個月后再次檢測,還出現高低不一,說明豬群里還存在源頭,母豬群還沒有凈化好。因此看藍耳病檢測報告,主要是要看穩定的分布圖。藍耳病的風險往往就出現兩極分化的豬群里。

     藍耳病的病原監測(PCR)有2個關鍵點,一個是4周-5周齡,第二個9周-10周齡。免疫后的母豬檢測出病原的幾率較低;

      四、后備母豬的“馴化”

     基礎種豬群藍耳病要穩定,是藍耳病抗體水平“大家”都高或者是“大家”都低,所以后備母豬需要“馴化”。母豬“馴化”目的是要后備母豬抗體水平與經產母豬抗體水平持平,母豬不穩定有時會呈現兩個正態分布(兩極分化),最危險的母豬還是陰性豬。比如后備豬是陰性,而經產母豬群是強陽性,最受傷害的是這些陰性的后備母豬。所以需要一個基準線(藍耳抗體水平基本一致),比如經產母豬群基準線是S/P是0.8-1.6,那后備母豬經過“馴化“,到達了0.8-1.6之間,才能進群。

      對于藍耳病檢測中出現S/P值超過2.5的豬只,最好隔離在某個區域單獨飼養,減少它們對其它豬只的感染。

      五、試驗室的現場學習

    試驗室檢查方法:ELISA。每種檢測方法都有它的優劣勢,但是要選擇適合自己場的方法。比如說檢測所需的時間,檢測結果的合理性等。

       1、酶標抗體和包被板是整個試驗試劑中最重要的、價格最貴的;注意使用的用量,避免浪費和人為的污染,遵循“只出不進”原則;

       2、接收新到的試劑盒后,須在包裝盒上注明接收的時間,使用原則是:先進先出;

      3、血液樣品送到檢測人員的手中,溶血是比較常見的,輕微的溶血對結果的影響較小,但嚴重溶血是不可以用的,最主要的是影響偽狂犬gE野毒的檢測結果,容易出現可疑的情況,影響到偽狂犬結果的判斷;

       4、血清在2-8℃冷藏可以保存7天,在-20℃冷凍可保存一個月;

      5、在操作過程中,必須有操作記錄表,詳細的記錄操作程序、時間;操作過程中最擔心的是樣品間的交叉污染,所以在加試劑時注意操作動作;

       6、檢測結束后,樣品不能立即處理丟棄,需保存一個月,便于特殊情況下復查;

       7、反應板要在恒溫箱中放置,可以更好的保證檢測數據的準確性。然而純粹靠空調來溫控反應溫度,數據會存在的一定的差異或誤差。

       8、對偽狂犬gB抗體的檢測最好采取1:40的稀釋法進行,以便能更好地對結果進行分析。

                養豬事業部/金翊坤



 
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